Le laboratoire de Biochimie de Bicêtre a une activité spécialisée centrée sur le diagnostic biochimique et moléculaire des Maladies Héréditaires du Métabolisme énergétique (MHM) avec atteinte hépatique et/ou neuromusculaire.  Son approche va du phénotype (caractères observables d’un individu) au génotype (composition génétique d’un individu) : elle s’appuie sur des tests d’orientation spécifiques, des mesures d’activités enzymatiques sur des cellules ou des tissus et une confirmation du déficit par une analyse moléculaire du ou des gènes impliqués dans le déficit enzymatique. Un laboratoire de culture cellulaire permet de préparer les cellules en vue d’une étude enzymatique ou moléculaire.

Depuis 2016, l’apport du NGS a permis d’analyser simultanément un grand nombre de gènes pour une pathologie donnée (métabolisme énergétique, pathologies hépatobiliaires). Le laboratoire de Biochimie est accrédité ISO15189 depuis 2013. Il fait partie de la plateforme commune de diagnostic de génétique moléculaire constitutionnelle.

Le secteur MHM du laboratoire est composé de biologistes médicaux (Anne Davit-Spraul, Pauline Gaignard, Elise Lebigot et Pierre-Hadrien Becker), 4 techniciens pour le secteur enzymologie, 3 techniciens pour les cultures cellulaires et 3 techniciens en biologie moléculaire.

Les pathologies concernées 

• Anomalies mitochondriales : anomalies du carrefour du pyruvate, anomalies du cycle de Krebs, déficits de la chaine respiratoire, anomalies de la béta-oxydation des acides gras.
• Anomalies du métabolisme des sucres : métabolisme du galactose, métabolisme du fructose et glycogénoses hépatiques.
• Anomalies du métabolisme de la tyrosine : tyrosinémie de type I.
• Pathologies hépatobiliaires: cholestases génétiques et lithiases biliaires, pathologies vasculaires du foie.

Ces activités sont adossées à différents centres de référence (CR) de prise en charge des maladies rares : CR des maladies héréditaires du métabolisme hépatique, CR des maladies mitochondriales, CR de l’atrésie des voies biliaires et des cholestases génétiques, et en lien avec les filières de santé Filfoie, Filnemus et G2M.

Le laboratoire est également agréé pour le diagnostic anténatal.

Techniques

• Polarographie, Spectrophotométrie, spectrofluorimétrie, LC-MSMS,
• Western blot, utilisation de substrats radiomarqués C14
• Cultures cellulaires : fibroblastes, cellules fœtales
• Séquenceurs nouvelle génération (NGS) Illumina MISEQ et NEXSEQ dédiés au séquençage ciblé (panels de gènes, ADN mitochondrial)

• Séquenceurs capillaires Abbot / Life technologies 3130XL et 3730S dédiés au séquençage Sanger

• PCR en temps réel Life technologies QS7 dédié au dosage génique (PCR quantitative)
• Etude de transcrits sur cDNA (sang, fibroblastes, tissus)

Les pathologies concernées 

• Anomalies mitochondriales : anomalies du carrefour du pyruvate, anomalies du cycle de Krebs, déficit de la chaine respiratoire, anomalies de la betaoxydation des acides gras.
• Anomalies du métabolisme des sucres : galactose, fructose et  glycogénoses hépatiques
• Anomalies du métabolisme de la tyrosine : tyrosinémie de type I
• Anomalies de transporteurs biliaires : cholestases héréditaires (PFIC, CNN, ICP, LPAC …)

Technologies utilisées

• Polarographie, Spectrophotométrie, spectrofluorimétrie, LC-MSMS,
• Western blot, utilisation de substrats radiomarqués  C14 et H3
• Cultures cellulaires : fibroblastes, cellules fœtales
• Séquençage Sanger, qPCR, NGS (séquençage nouvelle génération)

Publications

Davit-Spraul A, Fabre M, Branchereau S, Baussan C, Gonzales E, Stieger B, Bernard O, Jacquemin E  ATP8B1 and ABCB11 analysis in 62 children with normal GGT PFIC: phenotypic differences between PFIC1 and PFIC2 and natural history. Hepatology 2010;51:1645-1655

Gaignard P, Gonzales E, Ackermann O, Labrune P, Correia I, Therond P, Jacquemin E, Slama A.Mitochondrial Infantile Liver Disease due to TRMU Gene Mutations: Three New Cases.JIMD Rep. 2013;11:117-23.

Boutron A, Marabotti A, Facchiano A, Cheillan D, Zater M, Oliveira C, Costa C, Labrune P, Brivet M; French Galactosemia Working Group.Mutation spectrum in the French cohort of galactosemic patients and structural simulation of 27 novel missense variations. Mol Genet Metab. 2012 Nov;107(3):438-47.